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植物總蛋白提取試劑

發(fā)布時(shí)間: 2023-01-05  點(diǎn)擊次數(shù): 352次

植物總蛋白提取試劑產(chǎn)品詳情

 

描述:

植物組織成分復(fù)雜含有較多的酚類物質(zhì)、多糖、色素、次生代謝產(chǎn)物,這使得植物蛋白質(zhì)的分離提取變得困難。本試劑適用于多種植物根、莖、葉及果實(shí)等的新鮮或凍存組織,能夠快速有效地提取植物中的可溶性和疏水性蛋白成分,有效去除組織中所含的多糖、脂質(zhì)、此生代謝產(chǎn)物等干擾蛋白研究的成分,同時(shí)能夠使提取的蛋白質(zhì)處于最佳的活性狀態(tài)和檢測(cè)狀態(tài),適用于酶學(xué)活性測(cè)定,單向、雙向蛋白電泳、Western Blot和免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn)。

 

適用范圍:

提取多種植物組織和細(xì)胞如蘋果、花生、土豆、煙葉、菠菜、梅花等。

 

儲(chǔ)存:

4oC避光保存,12個(gè)月有效

 

規(guī)格:

50ml  100ml

 

操作步驟;

1. 組織勻漿,必須充分勻漿,這一步非常關(guān)鍵。

(1) 凍存組織勻漿:預(yù)先將研缽至于-20oC或-70oC冰箱內(nèi)預(yù)冷。取液氮凍存的植物組織,放入冰凍的研缽內(nèi)研磨成粉末,注意使樣本處于冰凍狀態(tài),如樣本顏色加深或變黑通常表明已經(jīng)融化。將研磨好的組織轉(zhuǎn)移到新管,按每200mg植物組織加0.5mL比例加入提取試劑,混勻后冰上放置20分鐘,期間可數(shù)次顛倒混勻,使蛋白溶解。

(2) 新鮮組織勻漿:取新鮮組織放入研缽中,按每200mg植物組織加0.5mL比例加入提取試劑,充分研磨至勻漿液中看不到大的塊狀或者片狀組織,保證樣本完-全研磨破碎。轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi),冰上放置20分鐘。

2. 離心:12000g離心15分鐘,將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,直接使用或-70oC儲(chǔ)存。

3. 后續(xù)處理:

(1) 如果進(jìn)行酶學(xué)測(cè)定,直接取蛋白上清液加入反應(yīng)。

(2) 沉淀蛋白;首先估計(jì)制備的蛋白上清液體積。方法一:加1/3體積30%三氯醋酸水溶液;方法二:加入6-10倍體積的1:1混合的丙酮/乙醇,-20oC沉淀1小時(shí)或過(guò)夜。4oC,5000g離心10分鐘,棄上清,空氣略干沉淀,用適量的1*SDS上樣緩沖液溶解沉淀,95 oC變性5分鐘,上樣電泳。適于進(jìn)行SDS-PAGE、Western Blot、雙向電泳等。

(3) 直接電泳:需加入4*SDS上樣緩沖液。上清如有少量色素一般不會(huì)影響蛋白電泳。

(4) 免疫共沉淀:用蒸餾水等比例稀釋提取的蛋白上清,進(jìn)行免疫共沉淀。

(5) 蛋白定量:用BCA蛋白定量試劑盒進(jìn)行定量。

 

 

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