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感謝南京的客戶訂購我司明膠酶譜法試劑盒

發布時間: 2017-03-09  點擊次數: 1153次

感謝南京的客戶訂購我司明膠酶譜法試劑盒!我司銷售的該試劑盒具有操作簡單,靈敏度高等特點,深受廣大科研用戶青睞,歡迎大家該產品的詳細信息。

酶譜法的基本過程是先將樣品進行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明膠)電泳分離,然后在有二價金屬離子存在的緩沖系統中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復活性,在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠,zui后用考馬斯亮藍將凝膠染色,再脫色,在藍色背景下可出現白色條帶,條帶的強弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。

復性原理:在電泳過程中,SDS與樣品中的MMPs結合(當然是可逆性結合),破壞其氫鍵、疏水鍵而使MMPs不能發揮其分解明膠的作用,而只有當將膠置Trition中洗脫(是放在搖床上搖,30min/次,做2次或15min/次,4次。靜置于Trition中是不妥的。)時,由于SDS被Trition結合而去除,從而使MMPs恢復了活性。

      

 

基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌,活化后能夠降解 細胞外基質的膠原蛋白,又稱膠原酶。通過影響細胞外基質,膠原酶參與胚胎發育、形態發生、組 織重塑等過程,并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經等許多疾病過程。血漿與組織中的 MMP-2MMP-9 參與各種生理與病理過程,其在診斷和治療中的意義日益受到重視。

本試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測 MMP-2、MMP-9  活性。Zymography  是一種廣為使用的、基 于 SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法,其靈敏度可達 1 nM,高于 ELISA 方法 2,其 基 本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的 SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進行電 泳, 電泳結束后取出凝膠與酶反應 Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深 染,形 成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色 而形成透 亮區域,從而能同時指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2MMP-9 特異蛋白底物及酶學反應緩沖液,可檢測少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶譜及活性,檢 測靈敏度~1 nM。試劑盒可進行 50 次標準小膠檢測,如果小膠加樣孔為 10~15個,則總計可檢測 500~750 個樣品。


適用: 檢測 MMP-2、MMP-9 酶譜及活性(Detect MMP2 and MMP9 as low as 1 nM)。

 組成與儲存 (50 assays)

1.2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml µl, 20 ºC;
2.10 × Substrate G, 50 ml, 20 ºC;
3. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 ºC, 使用時用蒸餾水稀釋;

4. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 ºC, 使用時用蒸餾水稀釋;

5. SDS-PAGE 凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液, 4 ºC。

 

感謝南京的客戶訂購我司明膠酶譜法試劑盒

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