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RNA溶解-長效保存液使用范圍

發布時間: 2023-01-10  點擊次數: 933次

RNA溶解-長效保存液使用范圍

 

 

描述:RNA極易降解。純化的RNA溶解于無RNase的TE或水中,即便是儲存于?20 oC也難免降解。為解決這一問題,可以將RNA沉淀或RNA溶液直接溶解于RNA溶解-長效保存液中,允許4 oC 過夜或?20 oC保存至少2年,保護樣品RNA免于降解。RNA溶解-長效保存液是RNA樣品運輸和中長期保存的最-佳選擇。需要時可用常規乙醇法沉淀回收RNA,或直接吸取儲存于RNA溶解保護液中的高濃度RNA(4 mg/ml)進行RNA電泳、Northern Blot。

 


儲存:4oC保存 12個月有效

 


用RNA溶解-長效保存液溶解RNA沉淀:
1   a) 對固體RNA沉淀而言,每0.4-4 mg RNA沉淀加入1 ml RNA溶解-長效保存液,室溫振蕩15-30分鐘溶解沉淀。干燥的RNA沉淀難以溶解,可50 oC加熱15分鐘或4oC溶解過夜。最好先用小體積無RNase的TE或水溶解RNA沉淀,然后按液態RNA操作。
b) 對液態RNA溶液,每0.4-4 mg RNA溶液加入1 ml RNA溶解-長效保存液,混勻。注意混合液中RNA溶解-長效保存液的體積百分比不低于80%。
2. 測定OD值。注意加入相應量的RNA溶解-長效保存液做空白。
3. 將溶解的RNA樣品儲存于?20 oC。

 


從RNA溶解-長效保存液中沉淀RNA:
1. 估計RNA溶液終體積。加入4倍體積的純乙醇,混勻。如果溶液中RNA含量低于0.25 mg/ml,或者溶液體積過小操作不便,可先加入1/20體積的5 N NaCl混勻,然后再加入4倍體積乙醇。
2. 室溫放置5分鐘。
3. 12,000 rpm 5 min。棄上清。風干,溶解。
4. 重新沉淀的RNA溶解后可用于RT-PCR反應。也可用于任何其他實驗。
直接使用RNA溶解-長效保存液中的RNA:
直接吸取RNA溶解-長效保存液中的RNA,進行普通或甲醛變性電泳和Northern Blot。進行甲醛變性電泳時,最后上樣樣品中的RNA溶解-長效保存液的濃度可高達50%。

 


注意:
1. 如果RNA用于逆轉錄RT-PCR,不推薦直接使用RNA溶解-長效保存液中的RNA,應該用乙醇沉淀RNA。
2. 在RNA溶解-長效保存液中的RNA的終濃度不應該超過4mg/ml。

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