植物過氧化氫染色液(DAB法)適合什么樣本
植物組織在脅迫環境條件下會產生多種活性氧(ROS),ROS活性非常大且極其不穩定,因此ROS的檢測通常因其最終產物而定。過氧化氫是活性氧的一種。在過氧化氫酶的催化下,過氧化氫能與DAB(3,3-二氨基聯苯胺四鹽酸鹽)迅速反應生成棕紅色化合物,從而定位組織中的過氧化氫,根據基本原理也稱其為DAB法。本產品就是基于以上原理,用于植物活組織中的過氧化氫染色。一般應用于較嫩的根尖、葉片等的整體染色,染色后有過氧化氫聚集的部位呈棕色至深棕色。
使用方法
1. 試劑準備:將100 mg DAB以磷酸緩沖液100 mL充分溶解,得到DAB染色工作液,避光4℃保存,一周內有效。注:DAB對光敏感,溶解過程需要避光,如果較難溶解,可通過超聲、磁力攪拌等方法促進溶解。
2. 采集經脅迫(例如重金屬)的植物幼苗或根尖,純水稍洗凈,置于濾紙上吸干多余的水分。將植物幼苗或根尖浸沒在DAB染色工作染液中,常溫避光染色2-6 h,至陽性部位出現深棕色,其余部位近無色或者呈植物本身的顏色即可。(根據植物幼嫩程度、顯色程度調整染色時間)
3. 用鑷子將植株幼苗或者葉片小心取出,浸入純水中來回漂洗3-5次,置于濾紙上吸干多余水分后,浸入95%乙醇中40℃處理3-16 h,目的是脫去植株幼苗或者葉片本身的葉綠素,脫色期間可多次更換新鮮的95%乙醇。
4. 用鑷子取出植株幼苗或者葉片,浸入純水中來回漂洗3-5次,置于濾紙上吸干多余水分后,將樣本轉入適量DAB樣本保存液中浸泡30 min,隨后可取出拍照。樣本可置于該保存液中常溫保存一周。
注意事項
1. DAB染色工作液配制好以后需4℃避光保存,一周內使用。存放時間過久,會影響顯色。
2. 因過氧化氫容易分解,且任何外在因素都可能刺激植物應激產生過氧化氫,因此植物樣本需要新鮮采集,并盡快完成染色。建議做陰性及陽性空白對照組。
3. 樣本染色完成后盡快拍照保存結果。
4. 操作時請穿實驗服,并佩戴一次性手套。