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elisa試劑盒結果出錯解決方案都在這里,快來觀看!

發布時間: 2018-11-26  點擊次數: 1564次

 

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提到ELISA,搞科研的童鞋們都很自信。“不就是zui簡單的抗原抗體反應嗎?簡單”是大多數童鞋的回答。但就是大家口中zui簡單的免疫反應,也掃倒了一大片人啊!假陽性或假陰性結果往往讓這部分童鞋哭笑不得卻又百思不得其解!

 

 

表著急,小編這就將師兄、師姐們的經驗奉上。

 

樣本處理經驗:血清是zui常用的 ELISA 標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致,分為內源性物質和外源性物質兩種。

 

內源性物質干擾解決方案:

 

有人認為大約 40% 的人血清標本中含有非特異性干擾物質,可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應物質和其它物質等。

 

(1)類風濕因子   人血清中 IgM、IgG 型類風濕因子(RF)可以與 ELISA 系統中的捕獲抗體及酶標記二抗的 FC 段直接結合,從而導致假陽性。解決的辦法是:用 F(ab)2 替代完整的 IgG、標本用聯有熱變性(63℃,10 min)IgG 的固相吸附劑處理(將熱變性 IgG 加入到標本稀釋液中同樣有效)、檢測抗原時,可以用 2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使 RF 降解。

(2)補體 ELISA 系統中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發生變構,其 FC 段的補體 C1q 分子結合位點被暴露出來,使 C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽性。解決的辦法是:用 EDTA 稀釋標本、用 53℃,10 min 或 56℃,30 min 加熱血清使 C1q 滅活。

 

(3)嗜異性抗體  人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體,可將 ELISA 系統中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物 Ig (s) ,但加入量不足或亞類不同時無效。

 

(4)嗜靶抗原的自身抗體  抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結合形成復合物,在 ELISA 方法中均可干擾抗原抗體測定結果。為避免以上情況出現,解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。

 

(5)醫源性誘導的抗鼠 Ig (s) 抗體  開展的用鼠源性 CD3 等單克隆抗體治療,用放射性同位素標記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術,均有可能使這些病人體內產生抗鼠抗體;另外,被 鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內也可以產生抗鼠 Ig (s) 抗體。這些病人 ELISA 測定時均可產生假陽性。解決的辦法是:測定抗原時,在標本中加入足量的正常鼠 Ig (s) ,從而克服由于上述原因造成的假陽性。

 

(6)交叉反應物質 類 AFP 樣物質,是與靶抗原有交叉反應的物質。在用多抗測定抗原時對測定結果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應的靶決定簇時,也會出現假陽性結果。

 

(7)標本中其它成分的影響  血清脂質過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對 ELISA 測定結果有干擾作用。

 

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