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RIPA裂解液如何提取細胞核蛋白,信帆生物為您答疑解惑

發(fā)布時間: 2018-01-26  點擊次數(shù): 8832次

RIPA裂解液如何提取細胞核蛋白,信帆生物為您答疑解惑

RIPA 組織/細胞裂解液使用說明書


規(guī)格:20ml/100ml 
本產(chǎn)品配有一支 PMSF(0.3ml/1.5ml)
保存:RIPA 裂解液 4℃保存,PMSF-20 ℃保存。
使?說明:
如發(fā)現(xiàn) RIPA 有沉淀,請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。
根據(jù)使用量,取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用(PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

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1、樣品前處理: 
a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。


b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。

c)對于組織樣品: 把組織剪切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作。


注意事項:
本試劑為強烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同時,也會將基因組一并釋放出來,若細胞量多會造成細胞裂解液粘稠:此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液,煮沸再離心,離心后直接上樣電泳;若想測定濃度,可入加少量 SDS(1%),煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑,所以不適合使用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒,請選擇 BCA 法或者 Lowry 法檢測蛋白濃度。


如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。

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