RIPA裂解液操作時(shí)這一步很關(guān)鍵！

本品為組織細(xì)胞裂解液。主要用于從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白。組織活細(xì)胞本產(chǎn)品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml），PMSF請(qǐng)于-20℃保存。

別名：              蛋白提取試劑盒

英文名稱：       RIPA buffer(high)

儲(chǔ)存條件：       附件PMSF-20℃，裂解液4℃。有效期1年

外觀（性狀）： 黃色澄清液體

單位 ：              瓶

使用說(shuō)明

如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀，請(qǐng)放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。根據(jù)使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的終濃度為1mM?；靹騻溆?（PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。

1、樣品前處理：

a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。

b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管，然后再裂解。

c)對(duì)于組織樣品： 把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。

用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

信帆生物對(duì)質(zhì)量的控制涵蓋生物試劑、放行、市場(chǎng)質(zhì)量反饋的全過(guò)程,包括原輔料、包裝材料、工藝用水、中間過(guò)程及成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和分析方法的建立、取樣、檢驗(yàn)和產(chǎn)品穩(wěn)定性考察和市場(chǎng)不良反饋樣品的復(fù)核等工作,確保產(chǎn)品的度、穩(wěn)定性。我們確保銷售給客戶的產(chǎn)品是能夠符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),適合客戶要求的產(chǎn)品。

注意事項(xiàng) ：

本試劑為強(qiáng)烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時(shí)，也會(huì)將基因組一并釋放出來(lái)，造成細(xì)胞裂解液粘稠，此時(shí)可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測(cè)定濃度，可入加少量 SDS（1%），煮沸后離心測(cè)濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒，請(qǐng)選擇BCA法或者Lowry法檢測(cè)蛋白濃度。

RIPA裂解液操作時(shí)這一步很關(guān)鍵！