高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測試劑盒樣本的處理方法!
高密度脂蛋白膽固醇(High density liptein cholesterol,HDL-C)主要在肝臟合成,是一種抗動脈粥樣硬化的脂蛋白,可將膽固醇從肝外組織轉運到肝臟進行代謝,由膽汁排出體外,其血漿含量的高低與患心血管病的風險呈負相關 。
高密度脂蛋白可以從細胞膜上攝取膽固醇,經卵磷脂膽固醇酰基轉移酶催化而成膽固醇酯,然后再將攜帶的膽固醇酯轉移到極低密度脂蛋白和低密度脂蛋白上。高密度脂蛋白中膽固醇含量比較固定,約含有人體膽固醇總量的20%~30%。
樣本處理:
血清(漿):直接測定,如超過線性范圍用生理鹽水稀釋后測定。
培養液樣本:吸取培養液,1000轉/分,離心 10分鐘,取上清測定。[注]:一般建議細胞密度在 100萬個/ml以上。
組織樣本:準確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9的比例,加入 9倍體積的勻漿介質,冰水浴條件下機械勻漿,2500轉/分,離心 10分鐘,取上清液待測。
[注]:1、如組織樣本為非高脂樣本,勻漿介質統一用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進行提取。2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿介質可統一用無水乙醇進行提取。
細胞樣本:A、細胞收集:將制備好的細胞懸液取出,1000轉/分,離心 10分鐘,棄上清液,留細胞沉淀;用等滲緩沖液( 0.1mol/L 、pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液)清洗 1~2次,同樣 1000轉/分,離心 10分鐘,棄上清液,留細胞沉淀;B、細胞破碎:加入0.2~0.3ml的勻漿介質(0.1mol/L、pH7~7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水)進行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W,3~5秒/次,間隔30秒,重復3~5次)或手動勻漿,制備好的勻漿液不離心待測。也可采用裂解液裂解( TritonX-100,1~2%,裂解 30~40分鐘),裂解好的液體不離心直接測定。
生物療法:
生物療法是利用蛋白質、DNA、抗體或其它從活組織中提取或合成的物質獲得療效的方法。分子生物學技術的發展已使重組蛋白作為藥物以非腸道應用成為可能。
體內試驗中較的是由apoA-I Milano和磷脂復合物組成的載脂蛋白,給動物模型和人類輸注這些載脂蛋白,結果證明減少了動脈粥樣硬化的發生。通過自身免疫方式產生針對膽固醇酯轉運蛋白的中和抗體也正在試驗,以降低LDL-C和增加HDL-C為目的的基因療法已初步建立起來。
因此,僅以升高HDL-C水平并非是開發HDL-C治療新措施的*目標。一些新的治療措施是以進一步增強HDL對膽固醇逆向轉運作用為目標,直接的apoA-I治療和ABCA1,ABCG1基因表達調節研究正是這種新觀念的重要體現
高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測試劑盒樣本的處理方法!