丙二醛(MDA)試劑盒基本信息
丙二醛(MDA)是常用的膜脂過氧化指標,在酸性和高溫度條件下,可以與硫代酸(TBA)反應生成紅棕色的*川(3,5,5—*基惡唑-2,4。二酮),其zui大吸收波長在532nm。但是測定植物組織中MDA時受多種物質的干擾,其中zui主要的是可溶性糖,糖與TBA顯色反應產物的zui大吸收波長在450nm,但532nm處也有吸收。植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加,因此測定植物組織中MDA—TBA反應物質含量時一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應物在532、450nm處的消光度值,所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應中需一定量的鐵離子,通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug·g-1,根據植物樣品量和提取液的體積,加入Fe3+的終濃度為0.5umol·L-1。
丙二醛(MDA)試劑盒檢測技術簡介
雙抗體夾心法
1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
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