鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF
(Streptavidin Berpharose FF)
1.產品介紹
鏈霉親和素瓊脂糖凝膠是一種將鏈霉親和素(Streptavidin)鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的親和層析分離介質,利用生*素與鏈霉親和素配體之間的相互作用分離純化生*素或生*素化的抗原、抗體、核酸等物質。
鏈霉親和素與生物之間的親和力很強,需要在變性條件下洗脫,這個特性可用于抗原與抗體的分離,如將生*素化的抗體結合在凝膠上,然后利用抗原抗體的親和特性純化無生*素化的抗原,抗原洗脫時抗體不會被洗脫。鏈霉親和素對亞氨基生*素的親和力相對較弱,可以在pH9.5-11.0結合,pH4.0時洗脫,不需要使用變性劑所以能更好的保持親和素偶聯物的活性。
2.規格
1ml(預裝柱)、5ml(預裝柱)、10ml(預裝柱)、20ml、100ml、500ml
3.產品性能
性能
指標
基質
6%瓊脂糖微球
配基
鏈霉親和素(Streptavidin)
配基密度
5mg/ml
載量
≥300nmol生*素/ml
≥6mg生*素化蛋白/ml
粒徑
45-165μm
推薦流速/*大流速
15-100 /700 cm/h
耐反壓
0.3MPa
pH穩定范圍
短時間pH2-11
長時間pH4-9
儲存緩沖液
20%乙醇
儲存溫度
4-8℃
3.純化流程
①緩沖液:
(1)純化生*素或生*素化物質
結合緩沖液:20mM NaH2PO4, 150mM NaCl,pH7.4
洗脫緩沖液:8M鹽酸胍,pH1.5
(2)純化2-亞氨基生*素或2-亞氨基生*素標記的物質
結合緩沖液:50mM碳酸銨,500mM NaCl,pH10.0
洗脫緩沖液:50mM乙酸銨,500mM NaCl,pH4.0
(3)純化抗原或抗體
結合緩沖液:20mM NaH2PO4,150mM NaCl,pH7.4
洗脫緩沖液:100mM甘*酸-鹽酸,pH3.0
注:
用于生*素化的抗體純化未生*素化的抗原(或生*素化的抗原純化未生*素化的抗體)有2種方法,①可先在游離狀態下抗原與抗體結合,然后當樣品純化即可;②也可以將生*素化的抗體(或抗原)先結合柱上,然后對應的未生*素化的抗原(或抗體)當樣品純化。
②樣品準備
上柱的樣品應盡量保持與結合緩沖液一致。通常可用透析、超濾、稀釋等方法處理樣品。并且上柱前應過0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物。
③樣品純化
(1)取適量的裝入合適的層析柱中,用結合緩沖液平衡5個柱體積,建議流速為100cm/h。
(2)將準備好的樣品緩慢上柱,為保證樣品與鏈霉親和素充分結合,應控制好上樣流速,建議流速為15-50cm/h。
(3)上樣后用結合緩沖液平衡10個柱體積以上,或平衡至基線,洗去雜質,推薦流速為100cm/h。
(4)用洗脫緩沖液洗10-20個柱體積,建議流速為100cm/h,收集的洗脫液應立即調節pH至穩定范圍,并根據需要置換緩沖液。
(5)洗脫目的蛋白后的柱子應立即用中性的結合緩沖液平衡,并用20%乙醇保存柱子,或進行下一次純化。
6.注意事項:
1)使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內產生氣泡,影響純化效果。
2)去除一些沉淀或變性物質,建議使用下面的方法用2倍柱體積的0.1M NaOH或6M鹽酸胍或8M尿素溶液進行清洗,然后立即用5倍柱體積的PBS,pH7.4清洗。去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質3-4倍柱體積70%乙醇或2倍柱體積的1% TritonX-100清洗,然后立即用5倍柱體積的PBS,pH 7.4清洗。
3)本產品保存條件為20%乙醇,4~8℃。
4) 2-25℃,常壓,避光運輸。
5)僅供科研實驗使用。
鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF
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