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Tris氯化銨紅細(xì)胞-裂解液

Tris氯化銨紅細(xì)胞-裂解液

簡(jiǎn)要描述:Tris氯化銨紅細(xì)胞-裂解液,本裂解液經(jīng)過濾除菌,經(jīng)過 Tris-NH4Cl Lysis Buffer 處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。

產(chǎn)品型號(hào):

所屬分類:生化類溶液

更新時(shí)間:2024-03-06

廠商性質(zhì):其他

詳情介紹

Tris氯化銨紅細(xì)胞-裂解液

產(chǎn)品名稱 Tris-氯化銨紅細(xì)胞-裂解液

產(chǎn)品規(guī)格】 100ml /500ml

儲(chǔ)存條件 4℃

有效期 12個(gè)月 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

在生物科研領(lǐng)域,經(jīng)常需要去除紅細(xì)胞,去除紅細(xì)胞的方法有多種,如 ACK Lysis Buffer、Tris-氯化銨紅細(xì)胞-裂解液、Gey's Lysis Buffer。Tris-氯化銨紅細(xì)胞-裂解液(Tris-NH4Cl Red Blood Cell Lysis Buffer),也稱為 Tris-NH4Cl Lysis Buffer,是一種從人、鼠 或其他哺乳動(dòng)物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細(xì)胞的溶液,其主要有效成分為 NH4Cl。

Tris-NH4Cl Lysis Buffer 經(jīng)過優(yōu)化配方,在裂解無核紅細(xì)胞的同時(shí)幾乎不損傷淋巴細(xì)胞(Lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞。本裂解液經(jīng)過濾除菌,經(jīng)過 Tris-NH4Cl Lysis Buffer 處理過的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。

 

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!

 

自備材料

胰蛋-白酶、離心機(jī)、PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液、胎牛血清

操作步驟(僅供參考):

(一)組織細(xì)胞樣本的常規(guī)操作

1、制備細(xì)胞懸液: 新鮮組織經(jīng)過胰蛋-白酶或膠原酶等消化處理,通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞 懸液,離心棄上清。

2、裂解: 加入 3~5 倍細(xì)胞沉淀體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解 1~2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

3、離心: 4℃,400~500g 離心 5min,棄紅色上清。如無低溫離心機(jī),本步驟亦可在室溫下操作。

如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不wan全,可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 各一次。

洗滌:根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,400~500g 離心 2~3min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上。

如有必要,重復(fù)上述步驟 5 一次,共洗滌 1~2 次。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

(二)組織細(xì)胞樣本的快速操作(無需洗滌)

1、制備細(xì)胞懸液:新鮮組織經(jīng)過胰蛋-白酶或膠原酶等消化處理,通過適當(dāng)方法制備成細(xì)胞懸液,離心棄上清。

2、裂解:加入細(xì)胞 5 倍細(xì)胞沉淀體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解 1~2min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

3、加入 15~20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻。

4、離心:4℃,400~500g 離心 5min,棄紅色上清,本離心步驟亦可在室溫下操作。

5、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不wan全,可以重復(fù)上述步驟 2~4 各一次。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

(三)血液樣本的常規(guī)操作

1、取新鮮抗凝血,400~500g 離心 5min,棄上清。

2、裂解: 加入 6~10 倍細(xì)胞沉淀體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解 1~5min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對(duì)于鼠的血液,裂解 1~2min 已經(jīng)足夠,對(duì)于人的外周血,宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至 4~5min,并且裂解過程中輕輕搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)

3、離心: 4℃,400~500g 離心 5min,棄紅色上清。如無低溫離心機(jī),本步驟亦可在室溫下操作。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不wan全,可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5、洗滌: 根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入適量 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃,400~500g 離心 2~3min,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細(xì)胞沉淀體積的 5 倍以上。

6、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意:對(duì)于微量或少量的血液樣本,可以不用第 1 步操作,可直接加入 10 倍血液體積的 Tris-NH4Cl Lysis Buffer 進(jìn)行第 2 步操作,并在 4℃或室溫裂解 4~15min。對(duì)于鼠的血液,裂解 4~5min 已經(jīng)足夠; 對(duì)于人的外周血,宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至 10min,但通常不宜超過 15min,并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。

(四)血液樣本的快速操作(無需洗滌)

1、新鮮抗凝血中加入10 倍體積的Tris-NH4Cl Lysis Buffer,輕輕吹打混勻,裂解4~15min。本操作步驟在 4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。(特別提醒:對(duì)于鼠的血液,裂解4~5min 已經(jīng)足夠,對(duì)于人的外周血,宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間至 10min,但通常不宜超過 15min,并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解。)

2、加入 20~30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,輕柔混勻。

3、400~500g 離心 5min,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

4、如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不wan全,可以重復(fù)上述步驟 2 和步驟 3 一次。

5、根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀,進(jìn)行計(jì)數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1、制備細(xì)胞懸液時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,不一定要制備成單細(xì)胞懸液。

2、后續(xù)試驗(yàn)如果是用于細(xì)胞培養(yǎng),操作過程中應(yīng)注意無菌操作,盡量在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作。

3、離心步驟盡量在 4℃離心機(jī)上操作。

4、常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于:常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心,可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好,不需要大體積的離心管;快速步驟少了一次離心過程,洗滌效果略差一些,同時(shí)需要大體積的離心管。

5、離心洗滌后,通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的檢測(cè)。

6、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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Tris氯化銨紅細(xì)胞-裂解液



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