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小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)elisa試劑盒基本信息
MMPs幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分,破壞腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障,在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵性作用,從而在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中的作用日益受到重視,被認(rèn)為是該過程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分離鑒別出26個成員,編號分別為MMP1~26。根據(jù)作用底物以及片斷同源性,將MMPs分為6類,為膠原酶、明膠酶、基質(zhì)降解素、基質(zhì)溶解素、furin活化的MMP和其他分泌型MMP。Ⅳ型膠原酶為其中重要的一類,它主要有兩種形式,一種被糖化,分子量為92kD,命名為MMP-9;另一種非糖化,分子量為72kD,被稱為MMP-2。當(dāng)前對MMP-2,MMP-9的研究較深入。
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)elisa試劑盒基本信息
實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。
購買我司elisa試劑盒可以提供免費代測服務(wù),客戶準(zhǔn)備好樣本,上海和南京地區(qū)的客戶可以提供免費上門取樣服務(wù)。其他地區(qū)的客戶,樣本用泡沫箱子包好,放干冰或者冰袋寄送給我們。代測時間為5到7個工作日提供原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù), 實驗操作步驟以及實驗所用儀器。