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脯氨酸的鑒別與含量測定

發布時間: 2017-07-14  點擊次數: 2584次

脯氨酸鑒別

(1)取本品與脯氨酸對照品各適量,分別加水溶解并稀釋制成每1ml中約含0.4mg的溶液,作為供試品溶液與對照品溶液。照其他氨基酸項下的色譜條件試驗,供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應與對照品溶液的主斑點相同。[5]

(2)本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜(《藥品紅外光譜集》1041圖)一致。[5]

檢查

1酸度

取本品2.0g,加水20ml溶解后,依法測定(2010年版藥典二部附錄Ⅵ H),pH值應為5.9~6.9。[5]

2溶液的透光率

取本品1.0g,加水10ml溶解后,照紫外-可見分光光度法(2010年版藥典二部附錄ⅣA),在430nm的波長處測定透光率,不得低于98.0%。[5]

3氯化物

取本品0.25g,依法檢查(2010年版藥典二部附錄ⅧA),與標準氯化鈉溶液5.0ml制成的對照液比較,不得更濃(0.02%)。[5]

4硫酸鹽

取本品1.0g,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ B),與標準硫酸鉀溶液2.0ml制成的對照液比較,不得更濃(0.02%)。[5]

5銨鹽

取本品0.10g,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ K),與標準氯化銨溶液2.0ml制成的對照液比較,不得更深(0.02%)。[5]

6其他氨基酸

取本品,加水溶解并稀釋制成每1ml中約含50mg的溶液,作為供試品溶液;精密量取1ml,置200ml量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液。另取脯氨酸對照品與蘇氨酸對照品各適量,置同一量瓶中,加水溶解并稀釋制成每1ml中各約含0.4mg的溶液,作為系統適用性試驗溶液。照薄層色譜法(2010年版藥典二部附錄ⅤB)試驗,吸取上述三種溶液各2μl,分別點于同一硅膠G薄層板上,以正丁醇-無水乙醇-濃氨溶液-水(8:8:1:3)為展開劑,展開,晾干,噴以茚三酮的丙酮溶液(1→50),在80℃加熱至斑點出現,立即檢視。對照溶液應顯一個清晰的斑點,系統適用性試驗溶液應顯兩個*分離的斑點。供試品溶液如顯雜質斑點,其顏色與對照溶液的主斑點比較,不得更深(0.5%)。[5]

7干燥失重

取本品,在105℃干燥3小時,減失重量不得超過0.3%(2010年版藥典二部附錄Ⅷ L)。[5]

8熾灼殘渣

不得超過0.1%(2010年版藥典二部附錄Ⅷ N)。[5]

9鐵鹽

取本品1.0g,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ G),與標準鐵溶液1.0ml制成的對照液比較,不得更深(0.001%)。

10重金屬

取本品1.0g,加水23ml溶解后,加醋酸鹽緩沖液(pH 3.5)2ml,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ H*法),含重金屬不得超過百萬分之十。

11砷鹽

取本品2.0g,加鹽酸5ml與水23ml溶解后,依法檢查(2010年版藥典二部附錄Ⅷ J*法),應符合規定(0.0001%)。

12細菌內毒素

取本品,依法檢查(2010年版藥典二部附錄ⅪE),每1g脯氨酸中含內毒素的量應小于10EU(供注射用)。

脯氨酸含量測定

取本品約0.1g,精密稱定,加冰醋酸50ml使溶解,照電位滴定法(2010年版藥典二部附錄ⅦA),用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定,并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于11.51mg的C5H9NO2。

體內代謝

在谷氨酰激酶(γ- GK)的作用下谷氨酸生成谷氨酰磷酸(γ-GP),而后在谷氨酸一半醛脫氫酶(GSADH)的作用下生成谷氨酸一半醛(GSA),GSA自發環化為吡咯琳-5-羧酸(P5C),在吡咯琳-5-羧酸還原酶(P5CR)的作用下還原為脯氨酸。

  脯氨酸在植物體內的降解基本上是合成過程的逆過程,這一過程首先發生在線粒體中,脯氨酸在線粒體中由脯氨酸脫氫酶(ProDH)催化,生成P5C,P5C在吡咯琳-5-羧酸脫氫酶(P5CDH)作用下生成谷氨酸,在植物受到滲透脅迫時,氧化降解的過程受到抑制,這樣細胞中脯氨酸含量增加,植物復水,此過程又會被誘導,導致脯氨酸含量下降。

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