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蛋白質羰基含量測試盒的實驗注意點

發布時間: 2023-12-11  點擊次數: 192次

蛋白質羰基含量測試盒的實驗注意點

(紫外比色法)

一、試劑組成和配制(50 /24 樣,貨號 A087-1-1):

試劑一:勻漿介質,無色透明液體,50mL×1 瓶;4℃保存;

試劑二:淺磚紅色液體,2.5mL×1 瓶;4℃避光保存;

試劑三:黃色液體,10mL×1 瓶;4℃避光保存;

試劑四:無色液體,10mL×1 瓶;4℃保存;

試劑五:無色液體,30mL×1 瓶;4℃保存;

試劑六:無色液體,70mL×1 瓶;4℃保存;

自備試劑:無水乙醇(分析純);乙酸乙酯(分析純);

洗滌液的配制:將無水乙醇和乙酸乙酯按照體積比 11

的比例混合配置成溶液,現用現配;

二、試劑組成和配制(100 /48 樣,貨號 A087-1-2):

試劑一:勻漿介質,無色透明液體,100mL×1 瓶;4℃保存;

試劑二:淺磚紅色液體,5mL×1 瓶;4℃避光保存;

試劑三:黃色液體,20mL×1 瓶;4℃避光保存;

試劑四:無色液體,20mL×1 瓶;4℃保存;

試劑五:無色液體,60mL×1 瓶;4℃保存;

試劑六:無色液體,70mL×2 瓶;4℃保存;

自備試劑:無水乙醇(分析純);乙酸乙酯(分析純);

洗滌液的配制:將無水乙醇和乙酸乙酯按照體積比 11

的比例配置成混合溶液,現用現配;

三、操作步驟:

1、血清(漿)前處理:取血清或血漿原液進行測定(同時用

雙縮脲試劑盒(本所有售,貨號 A045-1)測定血清(漿)

中總蛋白濃度);

2、組織樣本前處理:準確稱取組織重量,按重量(g):體積

(mL)=1的比例加入 倍的試劑一(如準確稱取組織

重量 0.1g 加入 0.9mL 的試劑一),冰水浴條件下機械勻

漿,2500 /,離心 10min,取上清即 10%勻漿 450µL,

加入 50µL 試劑二,混勻,室溫放置 10min 后,

11000r/min

離心 10min,取上清按操作表測定(同時取部分上清用考

馬斯亮藍試劑盒(本所有售,貨號 A045-2)測定勻漿的

總蛋白濃度)

四、測定意義:

一種檢測蛋白質羰基含量的試劑盒??珊啽恪㈧`敏的

檢測各種組織器官、血清、培養細胞(做法同組織樣本)

和細胞器等蛋白質羰基含量。其使用不需要昂貴的設備,

樣品處理簡單,可廣泛應用于各種疾病如衰老、動脈硬化

癥,糖尿病和帕金森綜合癥、風濕性關節炎等疾病的早期

診斷,抗氧化保健食品、抗氧化藥物和化妝品等的評價,

還可以用于評價由于一些環境有害因子如輻射、化學毒物

等對機體造成的氧化損傷。

五、實驗注意點:

1、在用無水乙醇乙酸乙酯混合應用液對反應沉淀進行洗

滌時,漩渦混勻一定要劇烈充分,混勻時間不得少于一

分鐘,反應沉淀物必須洗滌至白色,如果沉淀物還有黃

色殘留,適當增加無水乙醇乙酸乙酯混合應用液的洗滌

次數,以保證洗滌充分,否則會使得測定結果偏高;

2、在進行蛋白質羰基測定時,離心的轉速不可以隨意降

低,否則會使得測定結果偏高;

3、在進行蛋白質羰基測定時,建議使用圓底的離心管進

行實驗,這樣在進行無水乙醇乙酸乙酯混合應用液洗滌

時,可以保證沉淀被充分洗滌。不建議使用尖底的離心

管進行實驗。

蛋白質羰基含量測試盒的實驗注意點


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