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RT-PCR實驗檢測的服務內容

發布時間: 2023-11-30  點擊次數: 291次

RT-PCR實驗檢測的服務內容

服務內容:

1.制定個性化實驗方案:根據不同的實驗目的確定實驗方案、選定合適的內參;
2.檢測類別:mRNA、miRNA、lncRNA、DNA
3.樣本抽提及質檢:對客戶提供樣本進行RNA抽提,并利用NanoDrop進行樣本質檢;
4.定量PCR預實驗:包括樣本反轉錄為CDNA、配置PCR反應體系及進行Real-TimePCR反應;
5.正式定量PCR實驗:根據預實驗結果進行正式實驗;
6.數據分析:采用2- △△CT法進行分析,比較不同樣本間差異。

 


服務要求:
1.請提供組織樣本,細胞樣本,血漿或血清樣本,totalRNA;
2.請提供已知的全長基因序列或GeneBank號;
3.請提供盡可能詳細的背景資料:DNA/RNA來源、基因豐度等。

 

結果內容:整理好的報告,樣本收到之日起5個工作日內反饋質檢結果。

結果展示:


溶解曲線:



擴增曲線


數據統計


每個指標有2張圖。一張是擴增曲線,另一張是熔解曲線,用來證明PCR擴增中無非特異性擴增



送樣運輸要求:


1. 樣品處理


a. 動物組織:常規組織,脂肪組織,結締組織,纖維化組織適當增加。將組織剪切成合適大小后(建議組織塊長寬高均不大于0.5 cm),然后迅速浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:已浸入RNAsolidTM試劑中的組織經平衡一段時間后,可從溶液中取出,切成更小的組織塊,再重新放回RNAsolidTM試劑中;有些比較弱的液體滲透性組織如骨頭等,不適合用RNAsolidTM試劑進行RNA保護。)


b.植物組織:新鮮的葉、果肉、種子最少100 mg。將嫩葉,嫩莖組織切成合適的大小(建議長寬高均不大于0.5 cm)后,然后迅速浸泡于5~10倍體積的RNAsolidTM試劑中。(注意:某些植物組織天生具有的屏障,如葉子表面的蠟層可阻礙RNAsolidTM試劑的滲透,對于此類組織,通常需破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。)


c.細胞等樣本:收集不小于10^6個細胞的沉淀(用PBS清洗1-2次)。之后迅速加入5~10倍體積的RNAsolidTM試劑。


d.酵母、細菌等樣本:離心棄上清,收集小米粒大小的單菌體沉淀,然后迅速加入適量的RNAsolidTM試劑浸沒菌體沉淀。


e. RNA樣品: OD260/280為1.8-2.0,濃度≥100 ng/μL,體積≥20μL,干冰運輸。


f.cDNA:cDNA原液≥20 μL,干冰運輸。


 2. 樣品保存及運輸


加入有RNAsolidTM試劑的樣本可在37℃保存1~2天,2天以后部分組織中的RNA會開始降解。室溫(25℃)穩定保存1周,不會有明顯的RNA降解發生。大部分樣品置于RNAsolidTM試劑中,4℃條件下可穩定保存1個月,不會有明顯的RNA降解發生。長期存放可先將保存在RNAsolidTM試劑中的樣本4℃浸透過夜,然后將RNAsolidTM試劑吸出棄去,再將樣本放入-20℃或-80℃長期穩定保存3~5年。

 

RT-PCR實驗檢測的服務內容


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