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ELISA實驗操作前的準備
1、樣本要求:樣本應清澈透明,懸浮物應離心去除;避免使用溶血、高血脂樣本。樣本收集后若不立即檢測,凍存于-80°冰箱,避免反復凍融。樣本每次檢測使用前要混勻,用完后將相應版布局及樣本編號記錄在實驗本上,樣本及時放入冰箱。
2、實驗前準備
1.對應訂單找到相應的樣本和試劑盒。
2.核對樣本個數、種類、編號、樣本量是否足夠,核對試劑盒種屬、個數、日期,確定試劑盒是否夠用、有沒有過期。
3.注意訂單上備注欄客戶的要求,是否做復孔等。(以上三點有問題在實驗前及時與銷售溝通)
注:安排好時間,注意實驗節奏,做好相應的記錄幫助記憶,安排要有條理。
3、操作要求
1.試劑盒在使用前要平衡到室溫,底物在使用前應保存在暗處,避光;
2.正式實驗前需做預實驗確定合適的稀釋倍數,做預實驗前注意說明書上建議稀釋倍數。預實驗雙抗夾心法選取標曲最高兩個點,競爭法選取標曲高點與低點,選取兩個樣本根據建議稀釋倍數稀釋三個梯度;
3.孵育溫度與時間準確;洗板非常重要,每步洗板都一定要洗干凈;
4.標準品在用前稀釋,且稀釋的每一步都要混勻,注意標曲的起始濃度是否與重溶濃度一致;
5.點樣量一定要精確,打盡移液槍內樣本與試劑,快速、等量的將試劑分配到各個微孔中;
6.抗體和HRP稀釋倍數要嚴格按照說明書規定稀釋;
7.各步驟之間,需用封板貼密封反應板避免蒸發;實驗一旦開始,應連續完成所有的實驗步驟,切勿中斷。
ELISA實驗操作前的準備