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人免疫球蛋白G elisa試劑盒操作中哪部最關(guān)鍵

發(fā)布時間: 2023-06-26  點擊次數(shù): 335次

人免疫球蛋白G elisa試劑盒操作中哪部最關(guān)鍵


在收集樣本前都必須有一個完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進行檢測的樣本,及時儲存在4℃?zhèn)溆谩τ诟籼煸贆z測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的,最好-70℃凍存?zhèn)溆谩吮緫?yīng)避免反復(fù)凍融。


ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達到很高的敏感度。


操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80ug/ml5 號標準品150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
40ug/ml4 號標準品150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
20ug/ml3 號標準品150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
10ug/ml2 號標準品150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
5ug/ml1 號標準品150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl, 然后再加待測樣品 10µl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡 量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液:將 2 0 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 2 0 倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
 重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
     10 分鐘.
10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白孔調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

 

 

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