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小牛腸堿性磷酸酶產品簡介

發布時間: 2022-12-13  點擊次數: 582次

小牛腸堿性磷酸酶產品簡介

 

 

中文名堿性磷酸酶,可將DNA、RNA的5’端磷酸基團去除,常用于阻止載體的自連作用:在分子克隆實驗中,DNA連接酶催化DNA連接時需要有磷酸基團的存在,載體在經酶切后會在切點端保留一個磷酸基團。而載體經堿性磷酸酶去磷酸化后因5’端無磷酸基團,因而不可以和自身3’端連接。因此連接反應中載體本身會優先發生的連接反應被阻止,提高了目的片段插入率。另外,堿性磷酸酶還可制備用于5’端標記的DNA模板,以及用于該酶蛋白的脫磷酸作用等。

本品為小牛腸來源的堿性磷酸酶,可以降解幾乎所有磷酸單酯,但是該酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。

 

來源(Source)

攜帶小牛腸堿性磷酸酶表達質粒的酵母

 

質量控制(Quality Control)

無核酸外切酶、核酸內切酶、核糖核酸酶污染

 

熱滅活(Thermal Inactivation)

在螯合劑存在下,65℃加熱30 min,99%活性不可逆喪失;使用苯酚,可使酶完-全失活。

 

儲存液條件(Storage   conditions)

10 mM Tris-HCl(pH8.0),1 mM MgCl2,50 mM KCl,0.1 mM   ZnCl2,50% glycerol.

 

活性定義(Unit definition)

在pH9.8,37℃條件下,以對硝基苯酚磷酸鹽(p-nitrophenylphosphate)為底物,1分鐘生成1 µmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的堿性磷酸酶量定義為1個活力單位。

 

最佳pH(Optimal pH)

該酶在底物濃度高的情況下其最佳反應pH為10,在底物濃度低時,最佳pH為8,此時該酶活性較高濃度底物時稍低。

 

優化體系(Optimal Buffer)

AP Buffer(500 mM Tris-HCl pH9.0,10 mM   MgCl2)

 

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