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T4 DNA聚合酶使用詳情
T4 DNA Polymerase在模板以及引物存在的條件下,沿5’-3’方向催化合成DNA,T4 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性,但不具有5'→3'外切酶活性。運輸和儲存方法。
聚合酶(polymerase)又稱多聚酶。是專門生物催化合成脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的一類酶的統稱。
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶;(2)依賴RNA的DNA聚合酶;(3)依賴DNA的RNA聚合酶;(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶,它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ,PolⅡ和PolⅢ等);DNA聚合酶只能在有引物的基礎上,即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸,這DNA的合成方向記為5′→3′。換言之DNA聚合酶催化反應除底物(αNTP)外,還需要Mg2+ 、模板DNA和引物,迄今細胞內尚無發現可從單體起始DNA的合成。
干冰運輸。
-20℃保存。有效期一年。
應用
T4 DNA Polymerase可用于催化以下反應:DNA 5'或3'突出末端的平滑化
通過置換反應進行標記DNA探針合成
定點突變過程中第二鏈的合成
不依賴于連接反應的PCR產物克隆
單位定義
37℃、30分鐘內催化10 nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需要的酶量,定義為1個活性單位 (U)。