動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組DNA提取試劑盒檢測(cè)原理

 本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取組織和細(xì)胞的基因組DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料，能夠高效、專一吸附DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。 提取的基因組DNA的片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、 PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。

1、樣品的處理：
a、細(xì)胞：取 1×106
-1×107 個(gè)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞，貼壁細(xì)胞先用胰蛋白酶消化處
理，再用預(yù)冷的 PBS 吹打成細(xì)胞懸液，然后 12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞，盡量除去上清，加 200ul 溶液 A，
振蕩至*混勻。
b、組織：組織量不宜過(guò)大，一般不要超過(guò) 25mg，可以使用勻漿器勻漿，好用液氮研磨成粉末狀，再用
預(yù)冷的 PBS 或無(wú)菌水充分懸浮，然后 12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞，盡量除去上清，加 200ul 溶液 A，振蕩至
*混勻。
2、向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml)，55℃放置 15min。
3、加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml )，充分顛倒混勻，55℃水浴消化，細(xì)胞消化時(shí)間較短，組織消化時(shí)間較長(zhǎng)，
一般需要 1-3 個(gè)小時(shí)才能完成（鼠尾需要消化過(guò)夜）。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化*為止。
消化*的指標(biāo)是：液體清亮及粘稠。
4、加入 200ul 體積溶液 B，充分顛倒混勻，如出現(xiàn)白色沉淀，可放置于 75℃ 15-30min，沉淀即會(huì)消失，不影
響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明樣品消化不*，可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少及不純，還有可能導(dǎo)致堵塞
吸附柱。
5、加入 200ul 無(wú)水乙醇，充分混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響 DNA 的提取，可將溶液和絮狀沉淀都
加入吸附柱中。
6、12000rpm 離心 1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。

注意事項(xiàng):
1、試劑盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。
2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA的片段較小且提取量也下降。
3、如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響效果。
4、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率：洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH 值低于7.0會(huì)降低洗脫效率。