琥珀酸脫氫酶(SDH)檢測試劑盒使用貼士
產品說明:
SDH(EC 1.3.5.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中。SDH是線粒體的一種標志酶,位于線粒體
內膜上的一種膜結合酶,是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外,為多種原核細胞產能的呼吸鏈提
供電子。
SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸,脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸(PMS)傳遞還原2,6-二氯酚靛酚(DCPIP),
并且在600nm處具有特征吸收峰,通過600nm吸光度的變化,測定2,6-DCPIP的還原速度,代表SDH酶活性。
注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者
增加樣本量進行檢測。
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
SDH 活性的計算
(1) 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性(U prot)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×10
9]÷(Cpr×V樣) ÷T
=1555.556×(ΔA測定-ΔA空白)÷Cpr
(2) 按樣本質量計算
單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性(U/g 質量)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×10
9]÷(V樣÷V樣總×W) ÷T
=1571.111×(ΔA測定-ΔA空白)÷W
(3) 按細菌或細胞數量計算
單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘消耗1nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH活性(U/10
4 cell)=[(ΔA測定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反總×10
9]÷(V樣÷V樣總×500) ÷T
=3.142×(ΔA測定-ΔA空白)
V反總:反應體系總體積,0.98×10
-3L;ε:2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數,21×10
3L/mol/cm;d:比色皿光徑,
1cm;V樣:加入樣本體積,0.03mL;V樣總:加入試劑一和試劑二體積,1.01mL;T:反應時間,1min;Cpr:樣
本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;500:細菌或細胞總數,500萬;10
9:單位換算系數,1mol=109nmol。
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