乙酸激酶（ACK）活性檢測(cè)試劑盒操作原理

產(chǎn)品說(shuō)明：
ACK廣泛存在于生物體內(nèi)，催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP，是細(xì)菌碳代謝和能量代謝的關(guān)鍵酶，尤其
是在古細(xì)菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。
測(cè)定原理如下：（1）ACK催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP，（2）丙酮酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙酮酸，（3）乳酸脫氫酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+，（4）在340nm下測(cè)定NADH氧化生成NAD+
速率，即可反映ACK活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者
增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：
收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或
細(xì)胞（功率 20%，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次），15000g，4℃，離心 20 分鐘，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織處理：
稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿；15000g，4℃，離心 20 分鐘，取上清，置冰上待測(cè)
3、血清（漿）：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟
1、 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一于37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）保溫15min。

注意事項(xiàng)：
1、 測(cè)定過(guò)程中樣本和所有試劑在冰上放置，以免變性和失活。
2、 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入
37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過(guò)程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
3、 ΔA大于1時(shí)，建議稀釋后測(cè)量，注意計(jì)算公式乘以稀釋倍數(shù)；ΔA小于0.01時(shí)，建議延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間測(cè)量，注意
計(jì)算公式變化