植物類黃酮檢測試劑盒的技術參數
一、測定意義:
類黃酮是一類多苯化合物,屬于植物次生代謝物,對人
體具有消炎,抗菌,降血脂,清除體內羥自由基,預防癌癥
等作用
二、測定原理:
在堿性亞硝酸鹽溶液中,類黃酮與鋁離子形成在502nm處
有特征吸收峰的紅色絡合物,測定樣品提取液在502nm處的吸
光值,即可計算樣品類黃酮含量。
三、儀器設備(自備):
烘箱、粉碎儀、研缽、篩子、60%乙醇、離心機、可見分
光光度計、60℃震蕩恒溫箱。
四、試劑組成:(50T/48 樣)
提取液:60%乙醇,自備。
試劑一:液體2mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體2mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體25mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:標準品粉劑 1mg×1支,使用時加入1mL 60%乙醇,
于60℃恒溫振蕩10分鐘使其溶解,配成mg/mL
標準應用液。
五、操作步驟:
1、類黃酮提?。?/span>
干樣:將樣本烘干至恒重,粉碎,過40目篩之后,稱取約0.02g,
加入2mL 提取液,60℃震蕩提取2小時,10000g,室溫
離心10min,取上清,待測。
鮮樣:將植物用生理鹽水清洗后,將表面水分擦干,剪碎,
液氮研磨成粉狀,稱取約0.05g,加入2mL提取液(含
量低可酌情減少提取液量),60℃震蕩提取2小時,
10000g,室溫離心10min,取上清,待測。
2、操作表:
注:正式實驗前最好取1-2例相對差異較大的樣本進行預試,
ΔA測定大于1時需要稀釋樣本上清后再測定。
六、計算公式:
制作標準曲線:將1mg/mL標準液用60%乙醇稀釋成
0.1mg/mL、0.08mg/mL、0.06mg/mL、0.04mg/mL、
0.02mg/mL幾個濃度按操作表標準管及空白管進行實驗,
得出OD值后繪制標準曲線,如下:
則計算公式為:
類黃酮含量(mg/g)=(ΔA測定-0.0141)÷9.0771×提取液總體
積(2mL)÷樣本質量(g)
七、技術參數:
1、試劑盒檢出限為1μg/mL,如果ΔA測定值大于1,則需將樣本
上清液作適當稀釋以后測定;
2、本試劑盒回收率可達95%-100%,穩定性好,準確性高;
3、標準品配置時溫度低會使其溶解緩慢,60℃振蕩溶解時需
密封好,防止液體溢出造成損失;
4、假如沒有分光光度計,也可用酶標儀進行測定,波長不變
(或者在±10nm波動范圍內選擇)。
植物類黃酮檢測試劑盒的技術參數