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植物可溶性糖含量試劑盒檢測(cè)原理
測(cè)定意義:
糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一,也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。可溶性糖是指樣品中的還原單糖及在本法測(cè)定條件下能水解成還原單糖的蔗糖、麥芽糖和可部分水解為葡萄糖的淀粉。
測(cè)定原理:
蒽酮比色法。可用于可溶性單糖、寡糖和多糖的含量測(cè)定,具有靈敏度高﹑簡(jiǎn)便快捷﹑適用于微量樣品的測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。
樣品中可溶性糖的提取:
稱取0.1~0.2g 樣本,加入1mL 蒸餾水研磨成勻漿,倒入有蓋離心管中,95℃水浴10min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心10min,取上清液于10ml 試管中,用蒸餾水定容至10mL,搖勻備用。
測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm,蒸餾水調(diào)零。
2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95 度。
3、工作液的配制:在試劑一中加入2.5mL 試劑二。充分溶解后使用,如較難溶解,可加熱攪拌;用不完的試劑4℃保存一周;
可溶性糖含量計(jì)算:
a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 8.55x - 0.07;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。
2、按樣本鮮重計(jì)算:
可溶性糖(mg /g 鮮重)= [(ΔA+0.07) ÷8.55×V1]÷(W×V1÷V2)=1.17×(ΔA+0.07) ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計(jì)算:
可溶性糖(mg /mg prot)=[ (ΔA+0.07) ÷8.55×V1]÷(V1×Cpr)=0.117×(ΔA+0.07) ÷Cpr。
V1:加入樣本體積,0.04mL;V2:加入提取液體積,10mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;
W:樣本鮮重,g。
b.用96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 4.275x - 0.07;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。
2、按樣本鮮重計(jì)算:
可溶性糖(mg /g 鮮重)= [(ΔA+0.07) ÷4.275×V1]÷(W×V1÷V2)=2.34×(ΔA+0.07) ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計(jì)算:
可溶性糖(mg /mg prot)= [(ΔA+0.07) ÷4.275×V1]÷(V1×Cpr)=0.234×(ΔA+0.07) ÷Cpr。
V1:加入樣本體積,0.04mL;V2:加入提取液體積,10mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;
W:樣本鮮重,g。
注意:最-低檢測(cè)限為1mg/g 鮮重或10ng/ mg prot