考馬斯亮藍G250染色液的配制方法

簡介

產(chǎn)品描述：屬于三苯甲烷類染料，有G250和R250兩種，可與蛋白質(zhì)形成較強的非共價復合體，白-染料復合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負電荷陰離子（如磺酸基），從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見的藍色。考馬斯亮藍G250是Bradford法蛋白質(zhì)定量試劑的主要成分，考馬斯亮藍R250多用于聚丙烯酰胺凝膠電泳后蛋白質(zhì)條帶的染色。

性狀：藍色至深紫色粉末

CAS： 6104-58-1

分子式：C47H48N3O7S2Na；分子量：854kD

溶解性：溶于熱水（50mg/ml），乙醇（40mg/ml）

純度：≥90%

Bradford法測蛋白濃度試驗過程

1) 染液的配制：

將100mg的G-250溶解于50mL 95％的乙醇中，加入85％(w/V)的磷酸l00mL，加水定容至1L。

2) 標準曲線的繪制：

在7個試管中分別加入含0、10、20、30、40、50、60ug標準蛋白質(zhì)溶液，用水補足到60ul，加3mL染色液，混勻后室溫放置15分鐘，至595nm處比色測定。以蛋白質(zhì)含量為橫坐標，A595的值為縱坐標繪制標準曲線。

3) 測定：

取未知濃度的樣品60ul，同上測定，從標準曲線上查出相應(yīng)的含量。

該方法反應(yīng)快、操作簡便、消耗樣品少，但不同蛋白質(zhì)間的差異大，標準曲線的線性不好，顯色受時間和溫度影響較大。考馬斯亮藍染色能力強，特別要注意比色杯的清洗。較高濃度的去污劑(Triton X-100，SDS等)、尿素和硫酸銨對測定有干擾。

染色方法：

1）考馬斯亮藍G250染色液的配制

將0.2g G250溶于100ml水中（需要加熱至50°C促進溶解）。冷卻后，加入100ml 2N H2S04。室溫放置3h-過夜，然后濾紙除雜。過濾后的溶液，小心加入22.2ml 10N KOH，然后加入28.7g TCA。混勻后室溫放置> 3h，再過濾除雜從而獲得琥珀般的棕色溶液，不含藍色沉淀。

2）染色只需將膠*浸在此染色液中，約15 min后條帶就會顯示出來。幾小時后染色條帶的亮度和靈敏度會進一步加強。

3）染色液室溫約穩(wěn)定存放2-3周。

保存：室溫保存

備注：本公司所有產(chǎn)品科研使用