考馬斯亮藍G250染色液的配制方法
簡介
產(chǎn)品描述:屬于三苯甲烷類染料,有G250和R250兩種,可與蛋白質(zhì)形成較強的非共價復合體,白-染料復合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負電荷陰離子(如磺酸基),從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見的藍色。考馬斯亮藍G250是Bradford法蛋白質(zhì)定量試劑的主要成分,考馬斯亮藍R250多用于聚丙烯酰胺凝膠電泳后蛋白質(zhì)條帶的染色。
性狀:藍色至深紫色粉末
CAS: 6104-58-1
分子式:C47H48N3O7S2Na;分子量:854kD
溶解性:溶于熱水(50mg/ml),乙醇(40mg/ml)
純度:≥90%
Bradford法測蛋白濃度試驗過程
1) 染液的配制:
將100mg的G-250溶解于50mL 95%的乙醇中,加入85%(w/V)的磷酸l00mL,加水定容至1L。
2) 標準曲線的繪制:
在7個試管中分別加入含0、10、20、30、40、50、60ug標準蛋白質(zhì)溶液,用水補足到60ul,加3mL染色液,混勻后室溫放置15分鐘,至595nm處比色測定。以蛋白質(zhì)含量為橫坐標,A595的值為縱坐標繪制標準曲線。
3) 測定:
取未知濃度的樣品60ul,同上測定,從標準曲線上查出相應(yīng)的含量。
該方法反應(yīng)快、操作簡便、消耗樣品少,但不同蛋白質(zhì)間的差異大,標準曲線的線性不好,顯色受時間和溫度影響較大。考馬斯亮藍染色能力強,特別要注意比色杯的清洗。較高濃度的去污劑(Triton X-100,SDS等)、尿素和硫酸銨對測定有干擾。
染色方法:
1)考馬斯亮藍G250染色液的配制
將0.2g G250溶于100ml水中(需要加熱至50°C促進溶解)。冷卻后,加入100ml 2N H2S04。室溫放置3h-過夜,然后濾紙除雜。過濾后的溶液,小心加入22.2ml 10N KOH,然后加入28.7g TCA。混勻后室溫放置> 3h,再過濾除雜從而獲得琥珀般的棕色溶液,不含藍色沉淀。
2)染色只需將膠*浸在此染色液中,約15 min后條帶就會顯示出來。幾小時后染色條帶的亮度和靈敏度會進一步加強。
3)染色液室溫約穩(wěn)定存放2-3周。
保存:室溫保存
備注:本公司所有產(chǎn)品科研使用