Hoechst 33258活細(xì)胞和固定的細(xì)胞均可標(biāo)記

Hoechst 33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，它在嵌入雙鏈 DNA 后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光，對(duì)細(xì)胞的毒性較低，常被稱為DNA探針。實(shí)驗(yàn)研究中Hoechst 33258常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)，也可以用于普通的細(xì)胞核染色，或常規(guī)的DNA染色。活細(xì)胞和固定的細(xì)胞均可標(biāo)記。

使用方法

配制儲(chǔ)存液

用水配制成10mg/ml的母液于4℃避光保存。染色工作濃度0.5-10μg/ml。

A：固定的細(xì)胞或組織染色

免疫熒光染色完畢后按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst33258細(xì)胞核染色。如果不進(jìn)行其它染色，則直接按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst33258細(xì)胞核染色。

1) 對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片：加入適量Hoechst 33258工作液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞：至少加入待測(cè)染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

2) 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。 

3) 封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)350nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm。

B：活細(xì)胞或組織染色

1) 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液，充分覆蓋住待染色的樣品。通常對(duì)于六孔板一個(gè)孔需加入1ml染色液，對(duì)于96孔板一個(gè)孔需加入100μl染色液。     

2) 在 37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10～20 分鐘。

3) 用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。

4) 封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長(zhǎng)350nm，發(fā)射波長(zhǎng)460nm。

儲(chǔ)存溫度：-20℃避光