脂多糖(來源于大腸桿菌)使用方法
簡介:脂多糖,英文名稱Lipopolysaccharides,簡稱LPS,是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種*成分,位于細胞壁的外層并暴露于非莢膜細菌的細胞表面,有利于維持細胞外膜的完整性,保護細菌免受膽汁鹽和脂類抗生素的破壞。結構上,脂多糖由類脂A、核心多糖和O-多糖側鏈組成。其中類脂質A是構成細菌內毒素的主要成分,決定其毒性強弱;而O-多糖側鏈在不同細菌間是高度變化的,特異性決定細菌的血清型。
LPS可以引起免疫刺激的級聯反應和機體的毒性病理生理活動,包括釋放內毒素引起感染性休克從而導致末梢血管虛脫。常通過檢測LPS的存在來診斷腦膜炎。正是LPS與機體免疫機能的密切關系,生命科學研究常常提取LPS進行相關的研究,如闡明LPS的結構,代謝,免疫學,生理學,毒性,生物合成途徑;誘導生長促進因子如白介素的合成與分泌;誘導疾病研究的動物模型如炎癥反應,急性肺損傷。將LPS分別與FITC、TRITC或2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid (TNBSA)反應即可得到FITC、TRITC或TNP標記的LPS,主要用于非胸腺依賴性B細胞對細菌LPS的免疫應答研究。
使用方法
1.配制儲存液(用于細胞培養相關實驗):將1mg LPS重懸于1mL無菌平衡鹽溶液或細胞培養基,輕微旋渦振蕩直至粉末*溶解,即得到1mg/ml的儲存液。此儲存液可進一步用無菌平衡鹽或細胞培養基稀釋至需要的工作濃度。
2.儲存液的保存:本儲存液(1mg/ml)可放在4℃保存,約一個月穩定;也可分裝成單次用量后放到-20℃,2年穩定。避免反復凍融。
配制注意:LPS溶液應儲存于硅烷化容器內,因為LPS可吸附于塑料或某些玻璃器皿,尤其當其濃度<0.1mg/ml時。但當LPS濃度大于1mg/ml時,上述吸附則可忽略不計。如使用玻璃器皿,則需旋渦振蕩LPS溶液至少30min,以重溶被吸附溶質。
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