犬白細胞介素6(IL-6)檢測原理!
白細胞介素-6是趨化因子家族的一種細胞因子。白細胞介素interleukin 縮寫為IL,功能關系免疫反應的表達和調節,這種調節有來源于淋巴細胞或巨噬細胞等的許多因子參與。白細胞介素是由多種細胞產生并作用于多種細胞的一類細胞因子。由于初是由白細胞產生又在白細胞間發揮作用,所以由此得名,現仍一直沿用。
產品名稱:犬白細胞介素6(IL-6)ELISA檢測試劑盒
產品規格:96T
儲存條件:2-8℃,避光防潮保存。
有效期:6個月
檢測原理:試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被犬白細胞介素6(IL-6)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬白細胞介素6(IL-6)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
實驗步驟(僅供參考)
1. 從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
4. 隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。
樣本收集、處理及保存方法:
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。