中性蛋白酶,也稱為分散酶
中性蛋白酶是一種非特異性的金屬蛋白酶,被用來從各種不同組織或器官中消化細胞外基質,釋放并制備原代單細胞;或用于細胞培養中的細胞收獲或接種轉移;也被用于防止懸浮細胞培養時的細胞意外結團。
蛋白水解酶類,如胰蛋白酶、膠原酶和鏈酶蛋白酶都被用語來分散組織、分類細胞,但他們常傷害細胞,并且在培養時不穩定,甚至可能引入支原體污染。Dispase就沒有這個問題,不會給細胞膜帶來傷害,而且因為其來自細菌,故不會引入支原體或任何動物病毒;溫度、pH、血清成分等的差異對Dispase影響很小。Dispase經稀釋后其活性就大大降低,這也方便了后續的培養。Dispase甚至被加入細胞培養懸液中用于防止細胞團結。
優勢:
該酶已被證實作用迅速有效又溫和;
細胞能保持完整,細胞膜無損;
該酶非哺乳動物來源,不含支原體或動物病毒污染;
對于溫度、pH的改變、以及血清成分都很穩定;
使用螯合劑或稀釋就能簡單滅活;
酶活定義:
1U是在檢測條件下1分釋放相當于1 umol酪氨酸的Folin陽性氨基酸或肽的酶量;DispaseII:≥0.8 U (37℃,使用酪蛋白作為底物,pH 7.5);1U Dispase II基本相當于600U日本單位的Dispase。
抑制劑: EDTA、EGTA、Hg2+、其他重金屬。血清不會抑制酶活性。
使用方法:
用Hepes-buffered saline (50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl)溶解Dispase至10 mg/ml,使用時用細胞培養液稀釋到0.6-2.4 U/ml。不高于2.4 U/ml的 工作濃度,可用0.22 um的無菌濾膜過濾除菌。
保存方法:
保存在2-8℃;配成溶液后,在2-8℃ 2周內使用有效,在-20°2個月內使用有效;不要反復凍融;儲存液用Hepes鹽緩沖液稀釋后,2-8℃,3天內使用有效。