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如何操作甲狀腺球蛋白放免試劑盒?

發布時間: 2017-10-20  點擊次數: 2808次

甲狀腺球蛋白放免試劑盒基本信息簡介

甲狀腺球蛋白是甲狀腺濾泡上皮分泌的660 ku糖蛋白,每個Tg約有2個甲狀腺素(T4)和0.5個三碘甲腺原氨酸(T3)分子,儲存在濾泡腔中。溶酶體水解Tg表面T4T3并使之釋放入血,同時少量的Tg也釋放入血,部分Tg經甲狀腺淋巴管分泌入血。血循環中的Tg被肝臟的巨噬細胞清除。甲狀腺球蛋白(ThyroglobulinTg),是甲狀腺濾泡上皮分泌的660 ku糖蛋白,每個Tg約有2個甲狀腺素(T4)0.5個三碘甲腺原氨酸(T3)分子,儲存在濾泡腔中。溶酶體水解Tg表面T4T3并使之釋放入血,同時少量的Tg也釋放入血,部分Tg經甲狀腺淋巴管分泌入血。血循環中的Tg被肝臟的巨噬細胞清除。分泌因素,刺激Tg的分泌因素包括促甲狀腺素(TSH)和胰島素樣生長因子-1(IGF-1);抑制因子是γ-干擾素、α-腫瘤壞死因子和維甲酸。Tg的分泌率為100 mg/(60

甲狀腺球蛋白放免試劑盒如何操作 

實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。

1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。

為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內配制),37,60分鐘。

3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl37℃,60分鐘。

5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。

6. 依序每孔加底物溶液90μl37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

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