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如何篩選藥物

發(fā)布時間: 2017-01-10  點擊次數(shù): 2292次

篩選藥物是確定藥物效用*的一步,要知道抗癌藥物或抗體藥物偶聯(lián)物篩選測定是確立藥物候選物在殺死癌細(xì)胞中的效用的步。然而,整個過程的藥物篩選測定是耗時和繁瑣的。這篇文章的目的是使體外篩選測定更容易。

 

簡單來說,篩選藥物可被分解為3步。

 

步:細(xì)胞培養(yǎng)(plate 1)

 

. 仔細(xì)選擇目標(biāo)細(xì)胞,來測試化合物的功效。通常,選擇癌細(xì)胞系(組織特異性腫瘤類,耐藥/敏感性癌癥)用于藥物篩選。

. 使用96孔板,覆蓋廣泛的濃度范圍。

. 在200μl培養(yǎng)基/孔中保持鋪板密度為5000-20,000個細(xì)胞。密度將取決于細(xì)胞生長和孵育時間(24,48或72小時)。準(zhǔn)備大量的細(xì)胞稀釋液。

. 一個96孔板可以測定兩類藥物(藥物1:行A-D,列2-12;藥物2:行E-H,列2-12)中的兩種藥物的測試。

第二步:藥物稀釋 (plate 2)

 

. 這一步需要計算。你需要決定化合物的測試范圍。這通常基于與化合物的抗癌效率/毒性范圍相關(guān)的先前報道。如果你是個測試者,簡單地測試3個濃度范圍(如100μM,10μM和1μM)。

. 一旦你知道原始濃度范圍,決定目標(biāo)細(xì)胞能承受的濃度。將該濃度乘以2,即是工作濃度。

第三步:藥物與細(xì)胞融合

 

. 棄掉Plate 1的整個培養(yǎng)基。使用多通道移液槍,將95ul新鮮培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到Plate 1的每個孔中。然后,將95ul上述藥物稀釋物從Plate 2轉(zhuǎn)移到Plate 1相同(對應(yīng))的孔中。這時的陰性對照為:A1,B1,C1,D1;陽性(無藥物)對照為:E1,F(xiàn)1,G1,H1。孵育細(xì)胞。

. 一旦孵育完成,使用任何細(xì)胞活力/細(xì)胞毒性分析來測試候選藥物。

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